伴肌動(dòng)蛋白抗體，Anti-Nebulin

【資料簡介】

伴肌動(dòng)蛋白抗體，Anti-Nebulin抗體的效價(jià)鑒定 不管是用于診斷還是用于治療，制備抗體的目的都是要求較價(jià)。不同的抗原制備的抗體，要求的效價(jià)不一。鑒定效價(jià)的方法很多，包括有試管凝集反應(yīng)、瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)9ELISA）等。常用的抗原所制備的抗體一般都有約成的鑒定效價(jià)的方法，以資比較。如制備抗抗體的效價(jià)，一般就采用瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)來鑒定。

 

　　抗體的特異性鑒定 抗體的特異性是指與相應(yīng)抗原或近似抗原物質(zhì)的識(shí)別能力?？贵w的特異性高，它的識(shí)別能力就強(qiáng)。衡量特異性通常以交叉反應(yīng)率來表示。交叉反應(yīng)率可用競爭抑制試驗(yàn)測定。以不同濃度抗原和近似抗原分別做競爭抑制曲線，計(jì)算各自的結(jié)合率，求出各自在 IC50時(shí)的濃度，并按下列公式計(jì)算交叉反應(yīng)率。 如果所用抗原濃度IC50濃度為pg/管，而一些近似抗原物質(zhì)的IC50濃度幾乎是無窮大時(shí)，表示 這一抗血清與其他抗原物質(zhì)的交叉反應(yīng)率近似為 0，即該血清的特異性較好。

 

　　抗體的親和力 是指抗體和抗原結(jié)合的牢固程度。親和力的高低是由抗原分子的大小、抗體分子的結(jié)合位點(diǎn)與抗原決定簇之間立體構(gòu)型的合適度決定的。有助于維持抗原抗體復(fù)合物穩(wěn)定的分子間力有氫鍵、疏水鍵、側(cè)鏈相反電荷基因的庫侖力、范德華力和空間斥力。親和力常以親和常數(shù)K表示，K的單位是L/mol，通常K的范圍在 108 ～1010 /mol，也有多達(dá) 1014 /mol。抗體親和力的測定對(duì)抗體的篩選，確定抗體的用途，驗(yàn)證抗體的均一性等均有重要意義。

免疫用的動(dòng)物選擇適齡的健康雄性動(dòng)物，雌性動(dòng)物特別是妊娠動(dòng)物用于制備免疫抗體則非常不合適，有時(shí)甚至不產(chǎn)生抗體。由于對(duì)免疫應(yīng)答的個(gè)別差異，免疫時(shí)應(yīng)同時(shí)選用數(shù)只動(dòng)物進(jìn)行免疫。 抗原是多種多樣的，而且千差萬別。就其化學(xué)成分而言，有蛋白質(zhì)抗原、類脂抗原、多糖類抗原和核酸抗原等。就抗原性而言，有*抗原和不*抗原。為了獲得較好的抗血清，是選用蛋白質(zhì)抗原，如要制備用于篩選細(xì)菌表達(dá)的 cDNA 文庫或免疫印跡的抗血清，選用可降解的蛋白質(zhì)抗原。不同的抗原，其免疫原性的強(qiáng)弱均不相同，這種免疫原性的強(qiáng)弱取決于抗原的分子量、化學(xué)活性基團(tuán)、立體結(jié)構(gòu)、物理形狀和彌散速度等。

 

　　抗原的免疫劑量是依照給予動(dòng)物的種類、免疫周期以及所要求的抗體特性等不同而不同。劑量過低，不能引起足夠強(qiáng)的免疫刺激，免疫劑量過多，有可能引起免疫耐受。在一定的范圍內(nèi)，抗體的效價(jià)是隨注射劑量的增加而增高。蛋白質(zhì)抗原的免疫劑量比多糖類抗原寬。一般而言，小鼠的免疫劑量為 50μg～400μg/次， 大鼠為100μg～1 000μg/次， 兔為 200μg～1 000μg/2次。加強(qiáng)劑量為劑量的 1/5～2/5。

 

　　免疫劑量與注射途徑有關(guān)，一般而言，靜脈注射劑量大于皮下注射，而皮下注射又比掌內(nèi)和跖內(nèi)皮下注射劑量大，也可采用淋巴結(jié)內(nèi)注射法。加佐劑比不加佐劑的注射劑量要小，對(duì)家兔而言，采用弗氏*佐劑，則需注射 0.5mg～1mg/kg./次，如采用弗氏不*佐劑則注射劑量應(yīng)大10 倍以上。如要制備高度特異性的抗血清,可選用低劑量抗原短程免疫法。如需要獲得價(jià)的抗血清，宜采用大劑量長程免疫法。免疫周期長者，可少量多次。免疫周期短者，應(yīng)大量少次。 兩次注射的間隔時(shí)間應(yīng)長短適宜,太短起不到再次反應(yīng)的效果太長則失去了前一次激發(fā)的敏感作用。一般間隔時(shí)間應(yīng)為 5~7 天，加佐劑者應(yīng)為 2 周左右。 注射的 Ig 純度高，則一般不易引起過敏反應(yīng)，如注射血清，即使是少量，在再次免疫時(shí)，極易引起過敏反應(yīng)，所以一定要采取措施。